輪狀病毒Elisa試劑盒測定標記技術(shù)實驗原理
輪狀病毒Elisa試劑盒免疫標記技術(shù)是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質(zhì)標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。常用的標記物包括熒光素、酶和放射性核素等，用這3種標記物進行標記的ELISA試劑盒免疫檢測技術(shù)被稱為3大免疫標記技術(shù)。目前，使用的免疫標記物還有化學發(fā)光物質(zhì)、鐵蛋白和膠體金等。
1.原理
辣根過氧化物酶(HorserADIsh Peroxidase, HRP)
辣根過氧化物酶 (horse radish peroxidase，簡稱HRP，EC.1.11.1.7)是植物中研究得zui深入的一種過氧化物酶，早在20世紀30年代就有人著手從辣根中分離此酶，以后又制備出結(jié)晶。本實驗是以辣根為原料，經(jīng)過水的抽提，硫酸銨和丙酮分級分離，再經(jīng)鋅離子純化，透析除鹽，冰凍干燥，便可得到高純度的辣根過氧化物酶。
辣根過氧化物酶是一種含亞鐵血紅素的蛋白質(zhì)，HRP廣泛分布于植物界，它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多個同功酶組成，Mr在40000左右，等電點7.2。溶于水，溶解度為5%(W/V)，溶液呈棕紅色，透明。酶催化的zui適PH因供氫體不同而稍有差異，但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下的硫酸銨溶液。HRP可溶于0.58飽和度以下的硫酸銨溶液，ELISA試劑盒而0.62飽和度以上則不溶。該酶zui適pH7.0(對愈創(chuàng)木酚為氫給體而言)。在室溫下，HRP幾周內(nèi)穩(wěn)定，加熱到63℃，在15min內(nèi)穩(wěn)定。氧化還原電勢很低，pH6.08時，E 0 =-0.2070V，pH為7.71時，E′0 =-0.2787V。HRP的輔基和酶蛋白zui大吸收光譜分別為403nm和275nm，一般以OD403nm/OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的純度。
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。輪狀病毒Elisa試劑盒酶標記物質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到免疫酶技術(shù)的成功與否，因此被稱為關(guān)鍵的試劑。酶標記物中zui常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經(jīng)適當方法連接而成。酶標記抗體的質(zhì)量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質(zhì)量的酶(如辣根過氧化物酶，ELISA試劑盒簡稱HRP)國內(nèi)已有商品供應。高質(zhì)量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上，宜選用產(chǎn)率高、不影響結(jié)合物的活性和不混雜干擾性物質(zhì)且操作簡便易行的方法。
97963-62-7 相關(guān)物質(zhì)C標準品 20mg
92-61-5 東莨菪內(nèi)酯標準品 20mg Scopoletin
90-26-6 相關(guān)物質(zhì)C標準品 20mg
90101-87-4 黃酮哌酯相關(guān)物質(zhì)B標準品 20mg Flavoxate Related Compound B
887196-25-0 相關(guān)物質(zhì)B標準品 20mg
869-24-9 胺碘酮相關(guān)物質(zhì)H標準品 20mg Amiodarone Related Compound H
849206-43-5 雜質(zhì)A標準品 20mg
81-27-6 番瀉苷A標準品 20mg Sennoside A
輪狀病毒Elisa試劑盒
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