小鼠原代Ⅱ型肺泡上皮原代細胞
商品屬性:
規格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 | 貨號 | EY-XY3636 |
種屬來源 | 小鼠 | 組織來源 | 肺 |
生長特性 | 貼壁生長 | 形態特征 | 鋪路石狀細胞,不規則細胞樣 |
形態:鋪路石狀細胞,不規則細胞樣
培養基:小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞專用培養基
培養環境:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代特征:可傳5代左右;3代以內狀態最佳
細胞基本屬性:
種屬來源:小鼠
組織來源:肺肺
生長特性:貼壁生長
產品規格:5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率:每2-3天換液一次
消化液:
產品貨期:5-6周左右
運輸方式:T25培養瓶/ 順豐快遞(包郵)
供應限制:僅限于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
背景介紹::小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞采用彈性蛋bai酶灌注消化法結合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來,小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞分離自肺組織;肺泡由單層上皮細胞構成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經多次反復分枝成無數細支氣管,它們的末端膨大成囊,囊的四周有很多突出的小囊泡,即為肺泡。小肺泡細胞,又稱I型肺泡細胞,厚約0.1微米,基底部是基底膜,無增殖能力。大肺泡細胞,又稱Ⅱ型肺泡細胞,分泌表面活性物質(二棕櫚酰),以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細胞位于Ⅰ型肺泡細胞之間,數量較Ⅰ型肺泡細胞多,但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細胞小。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細胞核圓形,胞質著色淺、呈泡沫狀。電鏡下,細胞游離而有少量微絨毛,胞質內富含線粒體和溶酶體,有較發達的粗面內質網和高爾基復合體。核上方有較多的分泌顆粒,電子密度高、大小不等,直徑約0.1-1.0μm顆粒內含有平行排列的板層狀結構,稱為嗜餓性板層小體。小體內的主要成分為磷脂,以二棕櫚酰為主,此外還有糖胺多糖及蛋白質等。顆粒內物質釋放出來后,在肺泡表面形成一層粘液層,稱為表面活性物質(surfactant)。表面活性物質有降低肺泡表面張力、穩定肺泡大小的作用。呼氣時肺泡縮小,表面活性物質密度增加,表面張力降低,防止肺泡過度塌陷;吸氣時肺泡擴張,表面活性物質密度減小,肺泡回縮力加大,可防止肺泡過度膨脹。表面活性物質的缺乏或變性均可引起肺不張,過度通氣可造成表面活性物質缺乏;吸入毒氣可直接破壞表面活性物質。Ⅱ型肺泡細胞有分裂、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能,故具有修復受損傷上皮的作用。
細胞培養操作:
收貨處理取出T25細胞培養瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態
傳代密度細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養
傳代代數可傳5代左右;3代以內狀態最佳
傳代比例傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿
傳代方法:
1.吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;
2.添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養基終止消化;
3.用吸管輕輕吹打混勻,按1:2比例接種T25培養瓶傳代,然后補充新鮮的培養基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養;
4.待細胞貼壁后,培養觀察;之后每2-3天換液一次新鮮的培養基。
原代細胞培養的主要步驟包括:
?一、剝離組織,去除外膜、結締組織等?:將組織從動物體中取出,并去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。
二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?:使用生理鹽水或其他適當的緩沖液洗滌組織,然后將其剪成約1mm大小的小塊。
三、?用0.1%~0.2%的消化?:將剪碎的組織塊加入含有0.1%~0.2%的緩沖液中,進行消化。消化時間可根據具體實驗需求選擇熱消化(37℃)或冷消化(4℃),熱消化時間短,冷消化時間長但條件更溫和。
?四、吹打分散后,過濾、計數?:將消化后的細胞吹打到一個離心管中,然后過濾、計數。
五、?按30萬/毫升分瓶培養?:將計數后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養。
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